gilent液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序
1.目的：建立一個(gè)液相色譜的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。
2.范圍：適用于Agilent液相的使用。
3.責(zé)任：使用Agilent液相的化驗(yàn)員。
4.程序
4.1工作環(huán)境
實(shí)驗(yàn)室溫度為20～27℃，溫度變化<3℃/hr，相對(duì)濕度<80%，液相色譜儀工作臺(tái)，長(zhǎng)2米、寬0.8米、承重大于80公斤，離墻距離0.3米以上。單相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有單的良好接地。配置穩(wěn)壓電源，功率大于2.5千瓦。
4.2使用前的準(zhǔn)備
4.2.1二次蒸餾水，（建議用0.45微米水相濾膜過(guò)濾）；甲醇或乙晴（色譜純），（建議用0.45微米有機(jī)相濾膜過(guò)濾）；其他樣品所需流動(dòng)相，（都需經(jīng)過(guò)0.45微米濾膜過(guò)濾）。將上述溶劑放入超聲波池，除去氣泡，方可使用。
4.2.2把流動(dòng)相放入溶劑瓶中，打開(kāi)purge閥，單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup選項(xiàng)，進(jìn)入pump編輯畫面，設(shè)flow：5ml/min，單擊OK；單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊pump control選項(xiàng)，選中ON，單擊OK，則系統(tǒng)開(kāi)始purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，切換通道繼續(xù)purge，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止；單擊pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup選項(xiàng)，進(jìn)入pump編輯畫面，設(shè)flow：1.0ml/min，關(guān)閉purge valve。單擊pump下的的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積，也可輸入阻止分析和關(guān)泵的體積，單擊OK。
4.2.3進(jìn)行樣品前處理（稀釋或溶解至所需濃度）。
4.3實(shí)驗(yàn)步驟
4.3.1準(zhǔn)備
4.3.1.1開(kāi)啟Agilent 1100LC各模塊電源。
4.3.1.2打開(kāi)計(jì)算機(jī)，雙擊online圖標(biāo)。
4.3.1.3從"view"菜單中選擇"method and run control"畫面，單擊"view"菜單中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"標(biāo)志。
4.3.2數(shù)據(jù)采集方法編輯
4.3.2.1從“method"菜單中選擇"edit entire method"項(xiàng)，選中除"data analysis"外的三項(xiàng)，單擊OK，進(jìn)入下一畫面。
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息（如This is for test!），單擊OK進(jìn)入下一畫面。
4.3.2.3泵參數(shù)設(shè)定
在"flow"處輸入流量1ml/min，在"solvent"處輸入流動(dòng)相中各溶劑所占的比例，也可"insert"一行"timetable",編輯梯度。在"pressure limits max"處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護(hù)柱子，單擊OK進(jìn)入下一畫面。
4.3.2.4柱溫箱參數(shù)設(shè)定
在"temperature"下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度，并選中它點(diǎn)擊"more>>"鍵，如圖所示，選中"same as left"使柱溫箱的溫度左右一致，點(diǎn)擊OK進(jìn)入下一畫面。
4.3.2.5 VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定
在"wavelength"下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng)，在"peak width(response time)"下方點(diǎn)擊下拉式三角框，選擇合適的響應(yīng)時(shí)間，如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行，可以輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)。
4.3.2.6在"run time checklist"中，選中"data acquisition"，單擊OK。
4.3.2.7單擊“method"菜單，選中"save method as"，輸入一方法名，單擊OK。
4.3.2.8從"run control"菜單中選擇"sample info"選項(xiàng)，輸入操作者姓名，在"data file"中選擇"manual"或"prefix"。
4.3.2.9從"instrument"菜單中，選擇"system on"。
4.3.2.10單擊OK，等儀器ready，基線平穩(wěn)，從"method"菜單中選擇"run method"，進(jìn)樣。
4.3.2.11進(jìn)樣時(shí)，閥門位置處于"inject"位置，進(jìn)樣針取樣量應(yīng)為所規(guī)定體積的三倍，用濾紙拭凈針頭表面殘留液，進(jìn)樣時(shí)要輕而快，進(jìn)樣完畢應(yīng)快速將閥門搬至"load"位置，進(jìn)樣完畢，數(shù)分鐘后將進(jìn)樣針拔下，閥門回復(fù)到"inject"位置。 4.3.3數(shù)據(jù)分析方法編輯
4.3.3.1從"view"菜單中，單擊"data analysis"進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。
4.3.3.2從"file"菜單中選擇"load signal"選項(xiàng)，選中您的數(shù)據(jù)文件，單擊OK。
4.3.3.3做譜圖優(yōu)化，從"graphics"菜單中選擇"signal options"選項(xiàng)，從"ranges"中選擇"auto scale"及合適的顯示時(shí)間，單擊OK，或選擇"use ranges"調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。
4.3.3.4積分
4.3.3.4.1從"integration"中選擇"auto integrate"，如積分結(jié)果不理想，再?gòu)牟藛沃羞x擇"integration events"選項(xiàng)，選擇合適的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。
4.3.3.4.2從"integration"菜單中選擇"integrate"選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。
4.3.3.4.3如積分結(jié)果不理想，則重復(fù)上兩步動(dòng)作，直到滿意為止。
4.3.3.4.4單擊左邊"√"圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。
4.3.3.5打印報(bào)告
4.3.3.5.1從"report"菜單中選擇"specify report"選項(xiàng)，進(jìn)入。
4.3.3.5.2單擊"quantitative results"框中"calculate"右側(cè)的黑三角，選擇所需的報(bào)告形式，其他選項(xiàng)不變，單擊OK。
4.3.3.5.3從"report"菜單中選擇"print report"，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則單擊"report"底部的"print"鈕。
4.3.4關(guān)機(jī)
4.3.4.1關(guān)機(jī)前，先用水和有機(jī)溶劑對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行梯度沖洗，然后再用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)，然后關(guān)泵（適用于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]
4.3.4.2退出化學(xué)工作站，及其他窗口。
4.3.4.3關(guān)掉Agilent1100電源開(kāi)關(guān)，計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）。
4.4.1色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死。
4.4.2對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次。
4.4.3流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾、超聲，不能使用多日存放的純化水（易長(zhǎng)菌），應(yīng)每天更換純化水。
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