苯胺類化合物是土壤中常有的有機(jī)污染物。苯胺類化合物常見于印 染、制藥等土壤中，苯胺類是一種重要的有機(jī)化工原料，環(huán)境中的苯胺主要來源于橡膠、印染、制藥、塑料、陶器上釉等工藝生產(chǎn)過程。環(huán)境中苯胺的殘余量已引起 人們的極大關(guān)注，早已將其列人優(yōu)先監(jiān)測(cè)的污染物。主要引起高鐵血紅蛋白血癥和肝、腎及皮膚損害。眼睛接觸：可出現(xiàn)結(jié)膜角膜炎。皮膚接觸：可引起皮炎。因此，建立簡(jiǎn)單、快速、靈敏、有效的苯胺類測(cè)定方法十分必要。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1．1 儀器和試劑
1．1．1 儀器
Agilent 1200液相色譜儀；
色譜柱：Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .
1．1．2 試劑
1) 苯胺、鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、2，4一二硝基苯胺、
2，6一二硝基苯胺、3，5一二硝基苯胺為色譜純標(biāo)樣。
2) 二氯甲烷、丙酮、乙睛等均為色譜純?cè)噭?/span>
3) 氫氧化Na、鹽酸均為分析純?cè)噭?/span>
4) 無水硫酸鈉為分析純?cè)噭们霸隈R弗爐中350烘4 h。
5) 氟羅里硅土100～200目色層分析用，進(jìn)口分裝，400℃下烘2h，置干燥器中備用。
1．2 樣品制備
1．2．1 土樣預(yù)處理
將土壤樣品風(fēng)干、研磨后過篩，稱取土壤20g，加適量硅藻土拌勻，填人萃取池中，若萃取池中仍有空間，則用硅藻土填滿,萃取。取下樣品萃取液，于38℃用氮吹儀進(jìn)行濃縮至lmL，待凈化。
1．2．2 樣品凈化
苯胺類的預(yù)分離和濃縮：稱取含水量10％的氟羅里硅土6g，制成環(huán)巳烷漿液，濕法裝入內(nèi)徑為lOmm的玻璃柱中，新裝好 的色譜柱應(yīng)用二氯甲烷和丙酮沖洗數(shù)次，然后將預(yù)濃縮過的萃取液通過此玻璃柱，再用2mL的環(huán)巳烷洗K—D濃縮瓶三次并通過層析柱，用30mL二氯甲丙酮洗 脫液浸泡層析柱，再用30mL洗脫液洗脫柱中苯胺類，全部洗脫液接入氮吹瓶中于氮吹儀中濃縮定容到預(yù)定體積1mL，用Welchrom Syringe Filter Nylon 13mm 0.45um (Part Number:00802-02202,Lot Number:140108)過濾器對(duì)濃縮樣品進(jìn)行過濾，將此萃取液按下面色譜分析條件進(jìn)行分析測(cè)定。
1．3 色譜分析條件
流動(dòng)相為70％0．05mol／L乙酸胺緩沖液加30％乙睛，流速為0．8 mL／min；紫外檢測(cè)器，鑒定波長(zhǎng)為285 nm；進(jìn)樣量10 uL。色譜柱溫l6℃。
1．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
先以甲醇為溶劑將苯胺類7種單標(biāo)用重量法配制，充分溶解后，再分別量取一定體積混合成中間儲(chǔ)備液后逐級(jí)稀釋后液濃度見表1。
表1 苯胺類各成分混標(biāo)的濃度
苯胺 | 鄰硝基苯胺 | 間硝基苯胺 | 2,6-二硝基苯胺 | 3,5-二硝基苯胺 | 對(duì)硝基苯胺 | 2,4-二硝基苯胺 |
8.00 | 5.20 | 6.20 | 10.07 | 8.80 | 7.85 | 7.63 |
4.00 | 2.60 | 3.11 | 3.80 | 4.40 | 3.92 | 3.82 |
0.82 | 0.53 | 0.63 | 0.75 | 0.88 | 0.78 | 0.76 |
0.17 | 0.10 | 0.12 | 0.15 | 0.18 | 0.16 | 0.15 |
0.08 | 0.05 | 0.06 | 0.08 | 0.09 | 0.06 | 0.08 |
將以上苯胺類標(biāo)準(zhǔn)液依次測(cè)定后，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見表2。
表2 苯胺類各成分標(biāo)準(zhǔn)曲線
苯胺類成分 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 | 相關(guān)系數(shù) |
苯胺 | y=10.14x+0.2180 | 0.9999 |
鄰硝基苯胺 | y=32.00x+0.4730 | 0.9999 |
間硝基苯胺 | y=23.04+0.2886 | 0.9998 |
2,6-二硝基苯胺 | y=10.90x+0.3597 | 0.9996 |
3,5-二硝基苯胺 | y=15.32x+0.3326 | 0.9998 |
對(duì)硝基苯胺 | y=6.097x+0.1444 | 0.9999 |
2,4-二硝基苯胺 | y=14.50x+0.3369 | 0.9997 |
1．5 定性和定量計(jì)算
利用保留時(shí)間定性，利用苯胺類混合標(biāo)準(zhǔn)樣品做為外標(biāo)，利用峰面積進(jìn)行定量計(jì)算。
2 結(jié)果和討論
2．1 色譜條件的確定
2．1．1 流動(dòng)相的選擇
因此選擇70％0．05mol／L乙酸銨緩沖液加30％乙睛做流動(dòng)相。其色譜圖見圖2。
圖l 65％0．05mol／L乙酸銨緩沖液和35％ 甲醇流動(dòng)相
(1一苯胺、2一鄰硝基苯胺、3一間硝基苯胺、4一對(duì)硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺與7—3，5一二硝基苯胺)
圖2 70％ 乙酸銨緩沖液和30％ 乙睛流動(dòng)相
(1一苯胺、2一鄰硝基苯胺、3一間硝基苯胺、4一對(duì)硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺、7—3，5一二硝基苯胺)
2．1．3 柱溫的選擇
參考本地氣溫的變化規(guī)律，選擇16℃作為該色譜柱的適宜溫度。
2．1．4 準(zhǔn)確度、精密度和檢出限
依據(jù)美國EPA SW一846中規(guī)定的方法檢出限，連續(xù)分析7個(gè)接近檢出限濃度的實(shí)驗(yàn)室空白加標(biāo)樣品，分別在7個(gè)20g空白土壤中加入苯胺類混標(biāo)，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S，再依據(jù)公式MLD=St( n-1,0.99)計(jì)算出檢出限，在99％的置信區(qū)間，7個(gè)分析值的偏差均非常小，S=0.012-0.032，此時(shí)，t（6．0．99)=3.143，其中，為
t( n-1,0.99)是置信度為99％、自由度為n一1時(shí)的t值；其中n為重復(fù)分析的樣品數(shù)。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定，取7個(gè)20g空白土壤，分別進(jìn)行7次低濃度加標(biāo)回收測(cè)定，加標(biāo)量為表1中濃度按苯胺類混標(biāo)100uL的平均加標(biāo)回收率為63.8％ -92.7％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)≤4．8％。其檢出限與回收率結(jié)果見表3。
表3 精密度、加標(biāo)回收率與檢出限(n=7)
苯胺類 | 平均回收率/% | (x )/ug | RSD/% | 檢出限（mg/Kg） |
苯胺 | 91.8 | 0.73 | 2.9 | 5×10-4 |
鄰硝基苯胺 | 87.10 | 0.65 | 4.8 | 1×10-4 |
間硝基苯胺 | 78.0 | 0.60 | 4.4 | 1×10-4 |
2,6-二硝基苯胺 | 64.1 | 0.68 | 1.8 | 2×10-4 |
3,5-二硝基苯胺 | 92.8 | 0.79 | 3.2 | 2×10-4 |
對(duì)硝基苯胺 | 68.4 | 0.62 | 3.6 | 2×10-4 |
2,4-二硝基苯胺 | 69.0 | 0.64 | 3.0 | 2×10-4 |
2．1．5 實(shí)際樣品與空白測(cè)定
土壤取樣進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，其空白與樣品色譜圖見圖3、圖4，其空白土壤均沒有苯胺類檢出，實(shí)際樣品僅檢出了苯胺和間硝基苯胺，其中苯胺含量為0．006mg／kg間硝基苯胺含量為0．O03mg／kg。
三．結(jié)論
液相色譜儀可以快速、準(zhǔn)確的測(cè)定每種化合物的含量。 結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
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